Page 45 - 《中国药房》2021年8期

纯度＞98％）对照品均购自西格玛奥德里奇（上海）贸易 析，记录色谱图。以各待测成分质量浓度（x，μg/mL）为
有限公司；乙腈（色谱纯）购自德国Merck公司，甲醇（色 横坐标、峰面积（y）为纵坐标进行线性回归分析，结果见
谱纯）、甲酸（色谱纯）均购自天津科密欧化学试剂有限 表2。
公司；其余试剂均为分析纯或实验室常用规格，水为纯
300
净水。 250 400
2 方法与结果 200 300
2.1 溶液的制备 mAU 150 mAU 200
100
2.1.1 对照品溶液 分别称取没食子酸、1，6-二-O-没食 50 100
子酰基-β-D-葡萄糖、1，2，6-三-O-没食子酰基-β-D-葡萄 0 0
0 10 20 30 40 50 0 10 20 30 40 50
糖、1，2，3，6-四-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖、逆没食子酸 t，min t，min
对照品各适量，精密称定，以50％甲醇（含0.5％甲酸）溶 A.胡桃楸枝供试品溶液（编号SZ16） B.胡桃楸根供试品溶液（编号SG10）
解，配制成上述成分质量浓度分别为 0.316 7、0.323 3、
200 500
1.060 0、1.070 0、0.101 0 mg/mL 的对照品贮备液。精密 400
150
量取上述前4种贮备液各1 mL，置于5 mL量瓶中，加入 mAU 100 mAU 300
50％甲醇（含0.5％甲酸）稀释至刻度，摇匀，得质量浓度 200
50 100
分别为 0.063 3、0.064 7、0.212 0、0.214 0 mg/mL 的没食 0 0
子酸、1，6-二-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖、1，2，6-三-O-没 0 10 20 30 40 50 0 10 20 30 40 50
食子酰基-β-D-葡萄糖、1，2，3，6-四-O-没食子酰基-β-D- t，min t，min
C.逆没食子酸对照品溶液 D.混合对照品贮备液
葡萄糖混合对照品贮备液，于 4 ℃冰箱中保存，备用。
逆没食子酸因其在甲醇中溶解度相对较差，故不与其他 200
对照品混合配制。 150
2.1.2 供试品溶液 将不同批次的胡桃楸枝、根样品切 mAU 100
50
段，阴干后粉碎。取各样品粗粉（过二号筛）约 0.2 g，精
密称定，置于具塞锥形瓶中，分别精密加入50％甲醇（含 0
0 10 20 30 40 50
0.5％甲酸）10 mL，称定质量，超声（功率200 W，频率50 t，min
kHz）处理 30 min，放冷，再次称定质量，用 50％甲醇（含 E.空白溶液
注：1.没食子酸；2. 1，6-二-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖；3. 1，2，6-
0.5％甲酸）补足减失的质量，以 4 000 r/min 离心 5 min，
三-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖；4.逆没食子酸；5. 1，2，3，6-四-O-没食子
取上清液，滤过，取续滤液作为供试品溶液。
酰基-β-D-葡萄糖
2.2 含量测定方法的建立 Note：1. gallic acid；2. 1，6-di-O-galloyl-β-D-glucose；3. 1，2，
2.2.1 色谱条件与系统适用性试验 以 Agilent Po- 6-tri-O-galloyl-β-D-glucose；4. ellagic acid；5. 1，2，3，6-tetra-O-gallo-
roshell 120 SB-C18 （100 mm×2.1 mm，2.7 μm）为色谱柱， yl-β-D-glucose
Agilent Poroshell 120 SB-C18 （5 mm×2.1 mm，2.7 μm）为 图 1 胡桃楸枝和根供试品和对照品、空白对照的高效
预柱，以水（含 0.2％甲酸）为流动相 A、乙腈（含 0.2％甲 液相色谱图
酸）为流动相B进行梯度洗脱（0～5 min，5％B→10％B； Fig 1 HPLC chromatograms of test sample of branch
5～25 min，10％B→16％B；25～40 min，16％B→22％B； and root samples of J. mandshurica，reference
40～45 min，22％B→45％B；45～50 min，45％B→65％ B； substances and blank control
50～52 min，65％B→100％B；52～55 min，100％B）；流
表2 5个待测成分的回归方程与线性范围
速为 0.3 mL/min，柱温为 30 ℃，检测波长为 270 nm，进 Tab 2 Regression equation and linear range for 5
样量为5 μL。在该色谱条件下，没食子酸、逆没食子酸、
components
1，6-二-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖、1，2，6-三-O-没食子
待测成分 回归方程 r 线性范围，μg/mL
酰基-β-D-葡萄糖、1，2，3，6-四-O-没食子酰基-β-D-葡萄
没食子酸 y＝49.235x+18.737 0.999 9 0.989～63.3
糖的色谱峰均能够较好地分离，分离度均大于1.5；其他 逆没食子酸 y＝22.431x+8.110 0.997 3 1.58～101
成分对待测成分的测定无干扰，理论板数均大于3 000； 1，6-二-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖 y＝39.083x+11.822 0.999 9 1.01～64.7
空白对照溶液[50％甲醇（含0.5％甲酸）]对测定无干扰， 1，2，6-三-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖 y＝32.201x+16.975 0.999 9 3.31～212
1，2，3，6-四-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖 y＝20.083x－12.483 0.999 3 3.34～214
详见图1。
2.2.2 线性关系考察 分别精密吸取逆没食子酸对照 2.2.3 精密度试验 取胡桃楸枝（编号 SZ16）供试品溶
品贮备液和混合对照品贮备液各适量，用 50％甲醇（含 液适量，按“2.2.1”项下色谱条件连续进样测定6次，记录
0.5％甲酸）逐级稀释，得稀释倍数分别为 0、2、8、16、64 峰面积。结果，没食子酸、逆没食子酸、1，6-二-O-没食子
倍的系列对照品溶液。按“2.2.1”项下色谱条件进样分 酰基-β-D-葡萄糖、1，2，6-三-O-没食子酰基-β-D-葡萄糖、

中国药房 2021年第32卷第8期 China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 8 ·935 ·