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阳虚体征。剔除造模后过于虚弱的8只小鼠，留取70只                           泽度转好。其中，以酒蛤蚧组小鼠的症状和体征恢复最
        造模成功的小鼠进入正式实验。将这 70 只小鼠按体质                          好，小鼠的蜷缩、肢冷、毛发稀疏情况改善明显。各组小
        量和肾阳虚症状程度均分为模型组、阳性组（金匮肾气丸，                          鼠的症状和体征分级结果见表1（在给药期间，模型组小
                [8]
        6.4 g/kg） 、蛤蚧生品组（1.2 g/kg）、酒蛤蚧组（1.2 g/kg）           鼠死亡4只、阳性组小鼠死亡2只、蛤蚧生品组小鼠死亡
        和油酥蛤蚧组（1.2 g/kg），每组 14 只。除空白组和模型                    3只、油酥蛤蚧组小鼠死亡3只，因此数量有所减少）。
        组小鼠每天灌胃等体积生理盐水外，各给药组小鼠均灌                                    表1 各组小鼠症状和体征分级结果
        胃相应药物混悬液，给药体积均为 0.2 mL/10 g，每天给                     Tab 1 Grading results of symptoms and signs of kid-
        药 1 次，连续给药 14 d。各蛤蚧饮片组的给药剂量是根                              ney-yang deficiency of mice in each group
        据蛤蚧的临床人用量换算而得：蛤蚧饮片的临床人用量                                                   各症状和体征级别对应的小鼠只数
                                                            组别         n
                [2]
        为3～6 g ，以每日人用量为6 g计，体质量为60 kg的成                                       一级       二级       三级      四级
                                                            空白组       10      10        0        0      0
        人的用量为0.1 g/kg，再按体表面积法 折算成小鼠的等                       模型组       10       0        2        7      1
                                         [9]
        效剂量为1.2 g/kg。                                       阳性组       12       1        5        5      1
                                                            蛤蚧生品组     11       0        5        5      1
        2.3 指标检测
                                                            酒蛤蚧组      14      10        4        0      0
        2.3.1  症状和体征观察         在实验过程中，观察并记录小                油酥蛤蚧组     11       2        4        4      1
        鼠的体质量、症状和体征情况。实验结束前1天，根据中                           3.2 小鼠体质量、肾指数和睾丸指数的测定结果
        医基础理论结合肾阳虚表现的“形、迟、淡、寒”证候对各                              与空白组比较，模型组小鼠体质量显著减轻、肾指
                                         [10]
        组小鼠的肾阳虚症状和体征进行评分 ，评出每组小鼠                            数显著升高（P＜0.01），但睾丸指数差异无统计学意义
        中各症状和体征级别对应的小鼠只数。各级症状和体                            （P＞0.05）。与模型组比较，酒蛤蚧组和油酥蛤蚧组小
        征表现：与空白组体征相似，为一级；仅表现出自主活动                           鼠体质量显著增加（P＜0.05或P＜0.01），各给药组小鼠
        减少、嗜睡，为二级；反应迟钝、精神萎靡，体毛稀疏，毛                          的肾指数均显著降低、睾丸指数均显著升高（P＜0.05或
        （爪、尾）少光泽，为三级；蜷缩拱背，畏寒肢冷，毛发易脱                         P＜0.01）。与蛤蚧生品组比较，酒蛤蚧组小鼠的体质量
        落，毛（爪、尾）无光泽，为四级。                                    显著增加、肾指数显著降低（P＜0.01）。各组小鼠体质
        2.3.2  脏器指数、生化指标检测            取材前，小鼠禁食不             量、肾指数和睾丸指数测定结果见表2。
        禁水12 h。末次给药1 h后，称定小鼠体质量，摘眼球取                        表 2   各组小鼠体质量、肾指数和睾丸指数测定结果
        血后，取出肾、睾丸，精密称质量，并计算小鼠的脏器                                （x±±s）
        （肾、睾丸）指数[脏器指数＝脏器质量（mg）/体质量                          Tab 2  Results of body weight，renal index and testicu-
        （g）]。血样在室温下静置 5 h，然后以 3 000 r/min 离心                       lar index of rats in each group（x±±s）
        10 min，分离血清，再按照相应试剂盒说明书操作，测定                        组别      n     体质量，g        肾指数，mg/g    睾丸指数，mg/g
        血清中睾酮、皮质醇、尿素氮、肌酐水平。                                 空白组     10    35.12±2.18   13.36±1.33   7.33±1.05
                                                            模型组     10    25.83±3.38 ＊＊  20.41±2.82 ＊＊  7.77±0.68
        2.3.3  肾组织病理学变化观察            取小鼠右肾，置于 4％
                                                            阳性组     12    25.69±2.77   16.03±1.36 ##  9.72±1.55 ##
        甲醛溶液中固定，梯度乙醇脱水，二甲苯透明，常规石蜡                           蛤蚧生品组   11    26.68±2.31   17.84±2.17 #  9.51±1.30 ##
        包埋、切片（厚度约3 µm），行苏木精-伊红（HE）染色后，                      酒蛤蚧组    14    30.56±2.12 ##ΔΔ  14.38±1.15 ##ΔΔ  8.64±1.04 ##
                                                            油酥蛤蚧组   11    28.84±3.17 #  17.67±0.66 #  8.77±0.78 #
        在光学显微镜下观察肾组织病理学变化。
                                                                                                 #
                                                                                                        ##
                                                               注：与空白组比较， P＜0.01；与模型组比较，P＜0.05，P＜
                                                                              ＊ ＊
        2.4 统计学方法
                                                            0.01；与蛤蚧生品组比较，P＜0.01
                                                                             ΔΔ
            采用SPSS 21.0软件对数据进行统计分析。计量资                         Note：vs. blank group， P＜0.01；vs. model group，P＜0.05，P＜
                                                                              ＊＊
                                                                                                        ##
                                                                                                  #
        料以 x±s 表示，多组间比较采用单因素方差分析，若方                         0.01；vs. G. gecko raw product group，P＜0.01
                                                                                    ΔΔ
        差齐则组间两两比较采用 LSD 法，若方差不齐则用                           3.3  小鼠血清中睾酮、皮质醇、尿素氮及肌酐水平测定
        Dunnett’s T3法。P＜0.05为差异有统计学意义。                      结果
        3 结果                                                    与空白组比较，模型组小鼠血清中尿素氮和肌酐水
        3.1 小鼠症状和体征观察结果                                     平显著升高（P＜0.01），而睾酮、皮质醇水平差异无统计
            在实验期间，空白组小鼠饮食量和自主活动情况均                          学意义（P＞0.05）。与模型组比较，阳性组和酒蛤蚧组
        正常，皮毛滑顺，反应灵敏。模型小鼠的饮食量及体质                            小鼠血清中睾酮水平均显著升高（P＜0.05或P＜0.01），
        量下降明显，且有蜷缩懒动，嗜睡，肢体冷，毛发稀疏发                           各给药组小鼠血清中尿素氮和肌酐水平均显著降低
        黄、易脱落的现象。给药后，各给药组小鼠的症状和体                           （P＜0.05或P＜0.01）。与蛤蚧生品组比较，酒蛤蚧组小
        征较模型组均有一定改善，自主活动次数增加，皮毛光                            鼠血清中尿素氮、肌酐水平以及油酥蛤蚧组小鼠血清中


        ·1610  ·  China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 13                                中国药房    2020年第31卷第13期
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