Page 82 - 《中国药房》2026年6期
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          rJagged-1 ，CK组和UC组小鼠均灌胃和腹腔注射等体                      CD86、CD206 一抗（稀释比例分别为 1∶200、1∶150、1∶
          积生理盐水，每天1次，连续7 d。                                   100），于4 ℃下孵育过夜；加入相应二抗（稀释比例均为
          2.3 小鼠一般情况观察                                        1∶500），于室温下孵育 1 h；经显色、苏木精复染、返蓝、
              实验期间，每天定时对各组小鼠的体重、精神状态、                         脱水、封片后，采用病理切片扫描仪采集图像。以
          大便性状、活跃程度等进行观察并记录。                                  CD68、CD86、CD206阳性细胞（呈棕黄色）分别表示总巨
          2.4 小鼠疾病活动指数评分                                      噬细胞、M1型巨噬细胞、M2型巨噬细胞，按下式计算各
              末次给药24 h后，对每组小鼠的疾病活动指数（dis-                     型巨噬细胞极化比例：M1型巨噬细胞极化比例＝CD86
          ease activity index，DAI）进行评分。评分标准涉及如下               阳性细胞数/CD68 阳性细胞数×100%，M2 型巨噬细胞
          3 个方面——（1）粪便性状：正常，记 0 分；松散，记 2 分；                   极化比例＝CD206 阳性细胞数/CD68 阳性细胞数×
          稀便，记4分。（2）体重：无下降，记0分；下降＞1%～5%，                      100%。
          记 1 分；下降＞5%～10%，记 2 分；下降＞10%～15%，记                  2.8 小鼠结肠组织中巨噬细胞及Jagged-1/Notch1通路
          3分；下降＞15%，记4分。（3）粪便隐血：无血，记0分；隐                      相关蛋白表达检测
          血阳性（粪便隐血实验），记 2 分；肉眼血便，记 4 分                [8—9] 。     采用Western blot法检测。取“2.5”项下各组小鼠冻
          按下式计算DAI评分：DAI评分＝（粪便性状评分+体质                         存的结肠组织，经裂解、离心后取上清液，用二喹啉甲酸
          量下降评分+粪便隐血评分）/3。                                    法进行蛋白定量后煮沸变性。取变性蛋白适量，经电泳
          2.5 小鼠结肠组织病理形态观察                                    分离、转膜后封闭1 h；加入IL-6、IL-10、TNF-α、TGF-β1、
              评分结束后，将各组小鼠麻醉，以颈椎脱臼法处死，                         Jagged-1、Notch1、NICD、β-actin 一抗（稀释比例分别为
          在距肛门 1 cm 处取结肠组织，分成 2 份：一份于－80 ℃                    1∶1 000、1∶1 000、1∶1 000、1∶1 000、1∶1 000、1∶1 000、1∶
          下保存；另一份用磷酸盐缓冲液（PBS）清洗后以多聚甲                          1 000、1∶2 000），于 4 ℃下孵育过夜；洗膜后，加入相应
          醛固定，经常规石蜡包埋后切片（厚度约5 μm），取部分                         二抗（稀释比例均为 1∶5 000），于室温下孵育 2 h；洗膜
          进行苏木精-伊红（HE）染色，使用显微镜观察结肠组织                          后，经化学发光法显影后成像。使用 Image J 软件分析
          病理形态，并进行病理评分。评分标准如下：结肠黏膜                            蛋白条带灰度值，以 β-actin 为内参，计算目的蛋白与内
          无损伤，无炎症细胞浸润，记0分；结肠损伤局限于黏膜                           参蛋白的灰度值比值，以表示目的蛋白的表达量。
          层，炎症细胞浸润轻微，记1分；结肠损伤累及黏膜下层，                          2.9 统计学方法
          炎症细胞浸润中度，记2分；结肠损伤达到黏膜肌层，炎                               采用SPSS 25.0软件对数据进行统计分析。计量资
                               [11]
          症细胞浸润重度，记3分 。                                       料以 x±s 表示，多组间比较采用单因素方差分析，进一
          2.6 小鼠脾脏组织中M1、M2型巨噬细胞含量检测                           步两两比较采用SNK-q检验。检验水准α＝0.05。
              采用流式细胞术检测。摘取各组小鼠脾脏组织，转                          3 结果
          至含 1% 青-链霉素双抗、10% 胎牛血清的 RPMI 1640 培                 3.1 牡荆苷对小鼠一般情况的影响
          养基中，用 70 μm 滤网进行机械研磨解离，以梯度离心                            CK组小鼠摄食、饮水正常，毛发有光泽，活跃度高，
          法富集单核细胞；加入氨-氯化钾缓冲液，于室温下裂                            体重呈稳定增长趋势；与CK组比较，UC组小鼠摄食、饮
          解，再用含 3% 牛血清白蛋白的 PBS 封闭；加入 F4/80-                   水减少，毛发无光泽，活跃度下降，并可见大便不成形、
          FITC、CD16/32-APC、CD206-PE 一抗（稀释比例分别为                便血，且体重降低；与UC组比较，牡荆苷-L组、牡荆苷-H
          1∶100、1∶200、1∶150），于 4 ℃下避光孵育 30 min；用含             组、美沙拉嗪组小鼠上述症状均明显好转；与牡荆苷-H
          0.1%吐温20的PBS洗涤5 min×2次，离心，再以含0.1%                   组比较，牡荆苷-H+rJagged-1 组小鼠上述症状均有所
          吐温20的PBS 重悬，使用流式细胞仪分析M1、M2型巨                        加重。
          噬细胞含量（以 F4/80 标记巨噬细胞谱，在 F4/80 细胞群                   3.2 牡荆苷对小鼠DAI评分的影响
                                                   +
                    +
                                                   －
          中，CD16/32 CD206 为 M1 型巨噬细胞，CD16/32 CD206       +        与CK组比较，UC组小鼠的DAI评分显著升高（P＜
                          －
          为 M2 型巨噬细胞），再按下式计算 M1/M2 型巨噬细胞                      0.05）；与 UC 组比较，牡荆苷-L 组、牡荆苷-H 组、美沙拉
          比例：M1/M2 型巨噬细胞比例＝M1 型巨噬细胞含量/                        嗪组小鼠的 DAI 评分均显著降低（P＜0.05），且牡荆
          M2型巨噬细胞含量。                                          苷-H组、美沙拉嗪组均显著低于牡荆苷-L组（P＜0.05）；
          2.7 小鼠结肠组织中 M1、M2 型巨噬细胞极化比例                         与牡荆苷-H 组比较，牡荆苷-H+rJagged-1 组小鼠的 DAI
          检测                                                  评分显著升高（P＜0.05）。结果见表1。
              采用免疫组化法检测。取“2.5”项下各组小鼠剩余                        3.3 牡荆苷对小鼠结肠组织病理形态的影响
          结肠组织切片，依次行脱蜡、梯度乙醇水化、柠檬酸盐缓                               CK组小鼠结肠黏膜结构完整，上皮细胞排列规则，
          冲液抗原修复、3%过氧化氢阻断内源性过氧化物酶后，                           未见糜烂、出血及炎症细胞浸润；UC组小鼠结肠黏膜水
          用 5% 牛血清白蛋白于室温下封闭 30 min；加入 CD68、                   肿明显，肠上皮细胞脱落，局部可见糜烂出血，伴大量炎


          · 760 ·    China Pharmacy  2026 Vol. 37  No. 6                               中国药房  2026年第37卷第6期
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