Page 49 - 《中国药房》2024年22期
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significantly reverse the improving effects of high-dose of Shilinqing granules on the above indicators （P＜0.05）. CONCLUSIONS
          Shilinqing granules can inhibit the formation of calcium oxalate nephrolithiasis in rats， reduce the levels of inflammatory indicators
          and  its  mechanism  may  be  related  to  upregulating  protein  expression  of  SIRT1，  and  downregulating  protein  expressions  of  NF-κB
          and NLRP3.
          KEYWORDS    Shilinqing granules； calcium oxalate nephrolithiasis； inflammatory response； SIRT1/NF-κB/NLRP3 signaling pathway


              肾结石作为泌尿外科常见疾病之一，其发病率有逐                         机（武汉俊杰电子有限公司），RM2016型病理切片机（上
                      [1]
          年上升的趋势 。肾结石的形成是一个复杂的过程，可                           海徕卡仪器有限公司）等。
                                           [2]
          能与环境、饮食及遗传等多种因素有关 ，但具体机制尚                          1.2 主要药品与试剂
          未完全明确。研究指出，大约80%的肾结石以草酸钙为                              金钱草、海金沙、石韦、王不留行中药配方颗粒（批
          主要成分，草酸钙结晶可造成肾小管上皮细胞损伤，从                           号分别为 CK6J004、CK6H024、CK6S032、CK6W002）均
                                    [3]
          而导致晶体附着及肾功能异常 。此外，草酸钙结晶还                           购自四川新绿色药业科技发展有限公司；SIRT1 抑制剂
          会通过激活核因子κB（nuclear factor-κB，NF-κB）信号通             尼克酰胺的对照品（批号SENOO14196，纯度99.71%）购
          路来促使核苷酸结合结构域富含亮氨酸重复序列和含                            自艾普拜生物科技（苏州）有限公司；Von Kossa 染色试
          热蛋白结构域受体 3（nucleotide-binding domain leucine-      剂盒（批号G1043）、苏木精-伊红（HE）染色试剂盒（批号
          rich  repeat  and  pyrin  domain-containing  receptor  3，  G1003）、兔源NK-κB单克隆抗体（批号GB11997）、兔源
          NLRP3）炎症小体的形成，进而诱导树突细胞释放白细                         NLRP3 单克隆抗体（批号 GB114320）、兔源 SIRT1 单克
          胞介素 1β（interleukin-1β，IL-1β）、IL-18，最终导致肾脏          隆抗体（批号GB11171）、IL-1β试剂盒（批号GER0002）、
          炎症反应的发生 。沉默信息调节因子 1（silence infor‐                 乙二醇（批号D2127121）均购自北京索莱宝科技有限公
                        [4]
          mation regulator 1，SIRT1）可通过自身脱乙酰化来发挥              司；IL-18 试剂盒（批号：SEA064Ra）购自武汉优尔生科
          对细胞凋亡、自噬、氧化应激、炎症反应等生理过程的调                          技股份有限公司；氯化铵（批号 C11749013）购自上海麦
          控作用，还可通过调节NF-κB信号通路来抑制炎症因子                         克林生化科技有限公司；兔源甘油醛-3-磷酸脱氢酶
                                 [5]
          的释放，从而发挥抗炎作用 。                                    （GAPDH）单克隆抗体（批号GB15004）及辣根过氧化物
              近年来，中医药在治疗肾结石方面获得了丰富经                          酶标记的山羊抗兔免疫球蛋白 G 二抗（批号 GB23303）
          验，其中由经验方改良而得的中成药具有疗效好、副作                           均购自武汉赛维尔生物科技有限公司。
          用少、费用低等特点，具有良好的应用前景。石淋清颗                           1.3 实验动物
          粒源自河南中医药大学第一附属医院的经验方，由金钱                               SPF级雄性SD大鼠60只，体重200～220 g，由北京
          草、海金沙、石韦、王不留行组成。方中，金钱草可通过                          华阜康科技股份有限公司提供，动物生产许可证号为
          抑制NF-κB信号通路相关蛋白的表达，减轻机体炎症反                         SCXK（京）2020-0004。所有大鼠均饲养在河南中医药
                                               [6]
          应，在治疗草酸钙肾结石方面具有积极作用 ；海金沙可                          大学动物实验中心屏障级实验室内，饲养条件如下：温
          减少活性氧（reactive oxygen species，ROS）的产生，从而           度（20±2）℃，相对湿度50%～60%，每12 h光照/黑暗循
                                                       [7]
          减轻肾功能损伤，改善肾小球滤过功能，保护肾功能 ；                          环，通风良好。所有大鼠均适应性饲养1周后正式开始
          石韦具有利尿作用，其作用机制与枸橼酸钾相似；王不                           实验。本实验过程严格遵循动物实验 3R 原则，实验方
          留行具有利尿通淋之功效，可用于泌尿系结石、感染等                           案已通过河南中医药大学实验动物伦理委员会审批（批
                [8]
          的治疗 。作为该院治疗肾结石的常用药物，石淋清颗                           准编号DWLL202201009）。
          粒用于草酸钙肾结石患者的疗效较好，但其作用机制尚                           2 方法
          未阐明。基于此，本研究拟建立大鼠草酸钙肾结石模                            2.1 药液的制备
          型，基于SIRT1/NF-κB/NLRP3信号通路初步探讨石淋清                       取金钱草、海金沙、石韦、王不留行中药配方颗粒共
          颗粒对大鼠草酸钙肾结石的影响及潜在机制，以期为该                           65 g（各药质量比为6∶3∶2∶2），加水1 000 mL，回流提取
          药的进一步开发及临床应用提供参考。                                  2 h×2 次，过滤，合并 2 次提取液并减压浓缩。临用前，
          1 材料                                               用生理盐水将上述浓缩液稀释，得0.65、1.3、2.6 g/mL（以
          1.1 主要仪器                                           生药量计）的药液，备用。
              本研究所用主要仪器包括Chemray240型全自动生                     2.2 分组、造模与给药
          化分析仪（深圳雷杜生命科学股份有限公司），Dionex                            将大鼠随机分为对照组，模型组，石淋清颗粒低、
          ICS 6000型离子色谱仪（美国Thermo Fisher Scientific公         中、高剂量组及石淋清颗粒高剂量+抑制剂组，每组 10
          司），Silver UVIpro 型凝胶成像分析仪（英国 Uvitec 公              只。参考文献[9]的造模方法，除对照组大鼠自由饮水
          司），RT-6100型酶标仪（美国BioTek公司），E100型光学                 外，其余各组大鼠均饮用1%乙二醇溶液（替代水），并灌
          显微镜（日本 Nikon 公司），KZ-Ⅲ-F 型研磨仪、SVE-2 型               胃2%氯化铵溶液2 mL（每天1次，连续4周），以构建草
          电泳仪（武汉赛维尔生物科技有限公司），JB-P5 型包埋                       酸钙肾结石模型。造模同时，除对照组和模型组大鼠灌


          中国药房  2024年第35卷第22期                                              China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 22    · 2751 ·
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