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          量参考既往文献 确定，溶剂为0.5%的羧甲基纤维素钠                          2.7 子宫内膜异位病灶中 Notch1、MMP-9 和 VEGF 蛋
          溶液。各姜黄素组小鼠均灌胃给药，每日 1 次，给药 4                         白表达检测
          周，给药体积为 10 mL/kg。DAPT 组大鼠尾静脉注射                          各组取 3 只大鼠的部分子宫内膜异位病灶组织，经
          DAPT 7 mg/kg（DAPT 先用 10% 的二甲基亚砜溶解，再                 裂解、匀浆后，提取蛋白；蛋白定量后，煮沸5 min使其变
          用生理盐水稀释至所需溶度），分别于分组后的第 3、7、                         性，经电泳分离、转膜后，用 5% 牛血清白蛋白室温封闭
          10、14、17、21、24、28 天给药   [8―9] 。假手术组和模型组大            2 h，分别加入 Notch1、MMP-9、VEGF 和 GAPDH 抗体

          鼠每日灌胃去离子水，给药体积为10 mL/kg。                           （稀释比例均为 1∶1 000），4 ℃孵育过夜；再加入相应二
          2.3 子宫内膜异位病灶观察                                      抗（稀释比例为1∶10 000），室温孵育1 h。采用化学发光
              末次给药后，以小动物专用吸入麻醉机将大鼠麻                           法进行检测，并用 Image J 软件对目的蛋白条带进行分
                                                              析，以目的蛋白与内参蛋白（GAPDH）的灰度值比值代
          醉，用超声仪观察各组大鼠子宫内膜异位病灶，并测算
                                                              表目的蛋白的表达水平。
          子宫内膜异位病灶体积。检测后将大鼠开腹，肉眼观察
                                                              2.8 统计学方法
          位于腹壁上的子宫内膜异位病灶的色泽、形态及周围新
                                                                  使用SPSS 26.0软件进行统计分析。数据以x±s表
          生血管情况，用卡尺测量子宫内膜异位组织的长径、宽
                                                              示，满足正态分布和方差齐者，采用单因素方差分析进
          径，按照下列公式计算异位病灶体积：异位病灶体积
                                                              行多组间比较，采用LSD-t检验进行多组间两两比较；不
              3
                            2
         （mm）＝0.52×A×B（A 为长径，B 为宽径）。剪取完整
                                                              满足正态分布者，采用多个独立样本的非参数秩和检
          异位病灶，备用。
                                                              验。检验水准α＝0.05。
          2.4 子宫内膜异位病灶组织病理形态学观察
                                                              3 结果
              各组取5只大鼠的子宫内膜异位病灶，石蜡包埋，切
                                                              3.1 姜黄素对子宫内膜异位病灶外观和体积的影响
          片，以苏木精-伊红（hematoxylin-eosin，HE）染色，用显微
                                                                  给药前，超声仪测得各组大鼠子宫内膜异位病灶的
          镜观察其病理形态学变化。
                                                              体积相近，差异无统计学意义（P＞0.05），异位病灶周围
          2.5 腹腔液中IL-1β、IL-6和TNF-α水平检测
                                                              均可见丰富血流。给药后，与模型组比较，超声仪和直
              取各组大鼠的腹腔液，离心，取上清液，按照ELISA
                                                              尺测得的姜黄素低、中、高剂量组和 DAPT 组大鼠子宫
          试剂盒说明书操作，分别检测其中IL-1β、IL-6和TNF-α                     内膜异位病灶的体积均显著减小（P＜0.05），异位病灶
          的水平。                                                周围的血流亦均明显减少。与姜黄素低剂量组比较，姜
          2.6 子宫内膜异位病灶中 Notch1、MMP-9 和 VEGF                   黄素中、高剂量组和DAPT组大鼠子宫内膜异位病灶体
          mRNA表达检测                                            积均显著减小（P＜0.05）。结果见图1和表2。
              各组取 3 只大鼠的部分子宫内膜异位病灶组织，提                        3.2 姜黄素对子宫内膜异位病灶组织病理形态的影响
          取、纯化总 RNA，并反转录合成 cDNA。在反应体系中                            假手术组大鼠子宫内膜组织可见整齐排列的柱状

          加入 cDNA 8 μL，SYBR Green PCR Master Mix 20 μL，       上皮细胞，固有层中有腺体和血管分布。模型组大鼠子
          正、反向引物各 0.8 μL，最后用无核酸酶水加至 40 μL，                    宫内膜异位病灶呈囊泡状，柱状上皮细胞与假手术组大
          按下述条件进行扩增：96 ℃预变性 5 min；93 ℃变性 30                   鼠子宫内膜上皮细胞相似，囊内可见液体积聚。与模型
          s，58 ℃退火30 s，共35个循环；全部循环结束后在74 ℃                    组比较，姜黄素低剂量组大鼠子宫内膜组织可见萎缩的
          延 伸 5  min。 以 GAPDH 为 内 参 ，采 用 2     －ΔΔCt  法 计 算   柱状上皮，囊内积液消失；姜黄素中、高剂量组和 DAPT
          Notch1、MMP-9和VEGF mRNA表达水平。引物由生工                    组大鼠子宫内膜组织中柱状上皮消失，囊内有结缔组织
          生物工程（上海）股份有限公司合成，序列和扩增产物长                           生长。结果见图2。
          度见表1。                                               3.3 姜黄素对腹腔液中 IL-1β、IL-6 和 TNF-α 水平的
                    表1 引物序列和扩增产物长度                            影响
           基因        引物序列（5′→3′）                扩增产物长度/bp         与假手术组比较，模型组大鼠腹腔液中 IL-1β、IL-6
           Notch1    正向：TGCCGAGTGTGAGTGGGATGG      123        和 TNF-α 水平均显著升高（P＜0.05）。与模型组比较，
                     反向：AAGTGGAAGGAGTTGTTGCGTAGC              姜黄素低、中、高剂量组和 DAPT 组大鼠腹腔液中 IL-
           MMP-9     正向：AAAGGTCGCTCGGATGGTAT       136
                     反向：TCGACTCCAGTAGACAATCCTT                1β、IL-6和TNF-α（姜黄素低剂量组除外）水平均显著降
           VEGF      正向：CACGACAGAAGGGGAGCAGAAAG    150        低（P＜0.05）。与姜黄素低剂量组比较，姜黄素中、高剂
                     反向：GGCACACAGGACGGCTTGAAG
           GAPDH     正向：AGTGCCAGCCTCGTCTCATA       77         量组和 DAPT 组大鼠腹腔液中 IL-6 水平均显著降低
                     反向：GGTAACCAGGCGTCCGATAC                 （P＜0.05）。结果见表3。


          · 2746 ·    China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 22                            中国药房  2024年第35卷第22期
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