Page 43 - 《中国药房》2024年22期
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子宫内膜异位症（endometriosis，EMS）是育龄期女                号分别为 C09PDB、C12PDB、C06PZB）均购自北京北方
                                                       [1]
          性的常见疾病，在世界范围内的发病率为10%～15% 。                        生物技术研究所；异氟烷（批号 217181101）购自深圳瑞
          该病是指子宫内膜组织在宫腔与肌层以外的脏器或位                            沃德生命科技有限公司；核糖核酸（RNA）提取试剂盒和
          置生长，异位病灶有类似于肿瘤迁移、侵袭、种植和血管                          SYBR Green qPCR 预混试剂盒（批号分别为 AG21102、
          新生的特性。现代研究发现，Notch1信号通路能够受到                        AG11701）均购自湖南艾科瑞生物工程有限公司；反转
          雌激素受体活性的调节，进而影响细胞的增殖、凋亡和                           录试剂盒（批号 130516）购自莫纳（苏州）生物科技有限
          迁移，该信号通路的异常与恶性肿瘤的发生和发展关系                           公司。
              [2]
          密切 。EMS 是与雌激素密切相关的疾病，且病理过程                         1.3 动物
          与肿瘤相似，也被证实受到 Notch1 信号通路的调控即                           健康性成熟的 SD 大鼠，雌性，SPF 级，体重 180～
          Notch1 的 异 常 激 活 可 能 促 进 了 异 位 内 膜 的 迁 移 及         220 g，购自河北伊维沃生物科技有限公司，动物生产许
              [3]
          侵袭 。                                               可证号为SCXK（冀）2020-002。大鼠饲养于河北中医药
              姜黄素是从姜科植物姜黄、莪术、芥末、咖喱、郁金                        大学中药药理实验室，实验动物使用许可证号为SYXK
          等根茎中提取的一种天然多酚类化合物，具有显著的抗                          （冀）2022-010。大鼠饲养环境为恒温、恒湿，12 h/12 h昼
          肿瘤作用，其抗肿瘤机制可能与抑制Notch1蛋白活性有
                                                             夜交替；大鼠喂饲灭菌标准大鼠饲料和去离子水，自由
          关 。现代研究发现，姜黄素能够有效抑制异位子宫内
            [4]
                                                             取食和饮水。本研究动物实验经河北省中医院医学伦
                                                       [5]
          膜间质细胞的增殖、迁移和侵袭，但其机制尚不明确 。
                                                             理委员会审核批准，伦理审查批准号为 HBZY2023-YS-
          本研究拟通过建立 EMS 大鼠模型，探究姜黄素对 EMS
                                                             223-01。
          的干预效果以及对 Notch1 信号通路相关蛋白表达的影
                                                             2 方法
          响，以期为揭示姜黄素治疗EMS的机制提供参考。
                                                             2.1 模型制备
          1 材料
                                                                 取60只性成熟的SD雌性大鼠，按0.1 mg/kg灌胃雌
          1.1 主要仪器
                                                             二醇（使用时以1%的羧甲基纤维素钠溶液溶解，配制成
              本研究所用主要仪器包括：Mylab Five 型小动物超
                                                             0.01 mg/mL 溶液，下同），给药体积为 10 mL/kg，每日 1
          声仪（意大利 Esaote 公司），VME2 型小动物专用吸入麻
                                                             次，连续3 d，使大鼠动情周期趋于一致。采用自体子宫
          醉机（美国 Matrx 公司），1658001 小型垂直电泳槽、Gel‐
                                                             内膜移植法制备EMS模型；大鼠术前24 h禁食，以小动
          Doc 2000 型凝胶成像仪（美国 Bio-Rad 公司），StepOne‐
                                                             物专用吸入麻醉机麻醉，备皮后开腹，将左侧子宫用手
          Plus Real-Time 型聚合酶链式反应（PCR）（美国 Thermo
                                                             术线进行结扎，截取中间部分组织；将所取子宫组织纵
          Fisher Scientific 公司），DM500 型显微镜（德国 Leica
                                                             向剖开，修剪为 5 mm×5 mm 的组织片，用手术线钉于
          公司）。
                                                                                 [6]
                                                             腹壁上，逐层缝合腹部 。另取 10 只性成熟的 SD 雌性
          1.2 主要药品与试剂
                                                             大鼠行假手术，仅结扎和截取子宫组织，不进行异位种
              姜黄素原料药（批号 C400222，纯度≥98%）购自上
                                                             植。术后为预防感染，每只大鼠每日腹腔注射硫酸庆大
          海阿拉丁生化科技股份有限公司；雌二醇片（批号
                                                             霉素 0.4 万单位，给药体积为 10 mL/kg，连续 3 d。为促
          340436，规格 2 mg/片）购自比利时 Solvay S.A. 公司；
          Notch1 抑制剂（3，5-二氟苯乙酰基）-L-丙氨酰基-L-2-苯                进子宫组织块的植入，大鼠术后第2天开始灌胃雌二醇
          基 甘 氨 酸 叔 丁 酯（DAPT）（批 号 HY-12860，纯 度 ≥             0.1 mg/kg，每隔3 d给药1次，连续5次；假手术大鼠灌胃
          99.8%）购自美国MCE公司；兔源Notch1、金属基质蛋白                    等体积去离子水。末次灌胃雌二醇后的第3天，麻醉大
          酶9（matrix metalloproteinase-9，MMP-9）、血管内皮生长        鼠，超声仪示各组大鼠腹壁下方可见 EMS 病灶——呈
          因 子（vascular  endothelial  growth  factor，VEGF）、甘 油  囊状的灰黑色低回声区。以小动物超声分析软件测量
                                                                                                    3
          醛-3-磷酸脱氢酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydroge‐    并计算子宫内膜异位病灶体积，体积≥50 mm 者为EMS
                                                                         [6]
          nase，GAPDH）单克隆抗体（批号分别为 GR317746-27、                造模成功大鼠 ，可用于后续实验。
          ab760003、ab32152、ab9485）均购自美国 Abcam 公司；抗           2.2 分组与给药
          兔 IgG 二抗（批号 20000798）购自美国 Proteintech 公司；              将造模成功的大鼠随机分为模型组、姜黄素低剂量
          白细胞介素1β（interleukin-1β，IL-1β）、IL-6、肿瘤坏死因           组（60 mg/kg）、姜黄素中剂量组（120 mg/kg）、姜黄素高
          子α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）酶联免疫吸附测定          剂量组（240 mg/kg）以及DAPT组（7 mg/kg），每组10只；
         （enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）试剂盒（批      另取 10 只假手术大鼠作为假手术组。姜黄素的给药剂


          中国药房  2024年第35卷第22期                                              China Pharmacy  2024 Vol. 35  No. 22    · 2745 ·
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